Vitalnost se određuje u cilju određivanja broja živih spermatozoida. U tom cilju se koriste specijalne metode bojenja. Spermatozoidi sa oštećenom membranom primaju više boje i tako se prepoznaju.
HOS - hipoosmotski test se takođe koristi u cilju određivanja vitalnosti spermatozoida. Ukazuje na očuvanost membrane koja je polupropustljiva i ukoliko se spermatozoidi okruže hiposmotskim rastvorom doći će do njihovog bubrenja.